作者：黄宏思 黄卫彤 韦鹏涯 黄衍强 

【摘要】  目的观察黄芪多糖联合顺铂对小鼠H22肝癌移植瘤生长的抑制作用。方法复制H22肝癌小鼠移植瘤模型。将40只接种H22肝癌细胞昆明小鼠随机分成4组：对照组、黄芪多糖组（APS）、顺铂组（DDP）、联合组（APS+DDP）。治疗期间，观察小鼠的毒副反应以及生存质量。实验19 d后，处死全部小鼠，剥离皮下肿瘤，称小鼠肿瘤重量，计算出抑瘤率。结果APS单用组的H22肝癌平均瘤重为（1.29±0.29）g，明显低于对照组的（1.86±0.73）g（t=3.975，P<0.001）。APS与DDP合用组的H22肝癌平均瘤重为（0.52±0.31）g，均明显低于APS单用组（t=9.935，P<0.001）和DDP单用组（t=4.197，P<0.001）；其抑瘤率达72.0%，明显高于APS单用组（χ2=17.376，P<0.001）和DDP单用组（χ2=5.079，P<0.05）。联合治疗组小鼠毒副反应明显低于DDP组，生存质量优于DDP组。结论黄芪多糖和顺铂对小鼠H22肝癌移植瘤的生长具有协同抑制作用，并能降低顺铂毒副反应，提高生存质量。

【关键词】  黄芪多糖 顺铂注射液 H22肝癌移植瘤

黄芪是我国传统的补益中药，从黄芪中提取的有效成分黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides，APS)，经实验研究［1，2］，证实它具有增强机体免疫功能、抗肿瘤等多方面作用。

    顺铂(cisplatin，DDP)是临床常用的传统抗肿瘤药物，但可引起胃肠道、肾、神经系统及骨髓的毒性反应。

    联合用药可以降低药物的给药剂量，从而降低药物的毒副作用，并可提高抗肿瘤疗效，延缓耐药性的产生，是临床和实验研究抗肿瘤的主要方向［3］。为此，我们采取顺铂与黄芪多糖合用，以小鼠H22肝癌移植瘤为模型，观察其对小鼠移植瘤抗肿瘤效果。

    1   材料和方法

    1.1  实验动物和试剂选用清洁级的昆明小鼠，雌、雄兼用，40只，体重(20±2)g，6～8周，由广西医学大学医学实验动物中心提供。黄芪多糖（由本研究室制备）：黄芪根切片（系内蒙黄芪）经水煎并分级醇提，最后得80%醇提组分，即黄芪多糖；顺铂注射液，江苏豪森药业股份有限公司生产。小鼠H22肝癌瘤株，购自中国科学院细胞研究所，以腹水型传代保种；临用时，抽取H22腹水，以灭菌生理盐水稀释，备用。

    1.2  方法

    1.2.1  接种H22肝癌细胞  将预先接种H22腹水瘤的小鼠处死，从腹腔中抽取腹水瘤3.2 ml，用生理盐水稀释成5×106个cell/ml，按每天0.2 ml注射于小鼠腋下，待接种后第7天，可扪及肿瘤（直径约2～3mm），进行随机分组并开始治疗。

    1.2.2  分组及给药  将荷瘤小鼠随机分为4组，每组10只。对照组：生理盐水腹腔内注射（0.2 ml/只），1次/d。顺铂组：顺铂(0.2 ml/只，2 mg/kg ) 腹腔内注射，每3天一次，连续6次［4］。黄芪多糖组：黄芪多糖(0.2 ml/只，200 mg/kg ) 腹腔内注射，1次/d，连续18 d［5］。联合治疗组：黄芪多糖组和顺铂组治疗的联合。各组小鼠在治疗后第19天处死。

    1.2.3  小鼠毒副反应及生存质量  小鼠接种肿瘤后，通过观察小鼠皮毛、食欲、活动状况，对刺激反应及体重变化幅度，评价化疗毒副反应和生存质量。

    1.2.4  小鼠肿瘤瘤重和抑瘤率  停药后，称小鼠体重，并解剖取瘤块称重量，计算肿瘤抑制率。肿瘤生长抑制率（%）=（生理盐水组平均瘤重-治疗组平均瘤重）/生理盐水组平均瘤重×100%。

    1.3  统计方法  数据用SPSS10.0统计软件进行分析，组间数据比较采用t检验。

    2   结 果

    2.1  小鼠毒副反应及生存质量  治疗方案结束时，小鼠全部存活。通过精神状态、活动状况、对刺激的反应、体重下降幅度、食欲和脱毛等6项指标的观察，评价了小鼠毒副反应及生存质量。结果发现：APS组小鼠未见明显的药物毒副反应，生存质量最好，其次为联合治疗组，再次为对照组，而DDP组药物毒副反应最差，生存质量最差。联合治疗组小鼠药物毒副反应明显低于DDP组，这表明联合治疗可以降低DDP的毒副反应。

    2.2  小鼠瘤重和抑瘤率  见表1。接种后，成瘤率100%，实验结束后，APS单用组的H22肝癌平均瘤重为（1.29±0.29）g，明显低于生理盐水对照组的（1.86±0.73）g（t=3.975，P<0.001）。APS与DDP合用组的H22肝癌平均瘤重为（0.52±0.31）g，均明显低于APS单用组（t=9.935，P<0.001）和DDP单用组（t=4.197，P<0.001），其抑瘤率达72.0%，明显高于APS单用组（χ2=17.376，P<0.001）和DDP单用组（χ2=5.079，P<0.05）。表1  各组小鼠治疗后的瘤重和抑瘤率 与对照组比较：1)P <0.001；与APS组、DDP组比较，2)P <0.001；n=10

    3  讨论

    随着肿瘤免疫和肿瘤生物治疗研究的不断深入，人们逐步认识到宿主的免疫功能明显影响肿瘤的发生和发展，并影响到肿瘤患者的治疗和生存质量，化疗常可引起免疫功能抑制，是被迫终止肿瘤化疗的主要原因及治疗失败的重要因素。故在进行化疗时，应用生物反应调节剂，提高机体免疫功能，将有助于提高机体的抗肿瘤能力。

    据文献报道［1，2］，黄芪多糖能通过增强机体免疫功能而发挥体内抗肿瘤作用。黄芪多糖对化疗药物所致的外周白细胞减少有明显的保护作用［6，7］。有学者［8］联合使用黄芪多糖与顺铂杀伤人肝癌细胞进行体外实验研究，结果显示，减少DDP的剂量，并具有协同抗肿瘤作用。山广志等［9］研究表明注射用黄芪多糖与化疗同时应用，可保护骨髓造血功能，防止化疗所致的白细胞下降，改善患者的临床症状，提高体力状况变化（KPS）评分。同时提高患者的免疫功能、化疗耐受性，减轻不良反应，顺利完成治疗周期，提高患者生活质量，延长生存期。

    本实验发现，联合治疗组的毒副反应和生存质量优于DDP治疗组，这说明APS具有提高生存质量和降低化疗毒性的特点。目前临床上强调在延长肿瘤患者生存期间的同时，更应积极改善或提高患者的生存质量，二者是统一的，治疗方案的制定应兼顾二者。

    本实验表明联合治疗组抑瘤率明显高于APS组和DDP组，表明联合治疗效果优于单纯的APS和单纯的DDP治疗，联合治疗较DDP单药治疗有更强的抗肿瘤作用。本实验结果对临床治疗肿瘤用药有一定指导作用。

【参考文献】
  ［1］ 许杜娟,陈敏珠.黄芪多糖对小鼠免疫功能的影响［J］. 安徽医学,2003,7(6):418.

［2］ 许杜娟,陈敏珠. 黄芪多糖的抑瘤作用及其机制［J］.中国医院药学杂志,2005,25(10):923.

［3］ 甄永苏.抗肿瘤药物研究与开发［M］.北京:化学工业出版社,2004：742.

［4］ 张 平,贺兼斌.苏拉明联合顺铂对肺癌小鼠移植瘤生长和转移的影响［J］.癌症,2006,25(4):409.

［5］ Folkman J,Shing Y.Angiogenesis［J］．J Biol Chem,1992,267 1093 1.

［6］ 张 琰,程建峰,贺建荣.黄芪多糖对环磷酰胺致小鼠骨髓抑制及毒性的保护作用［J］. 第四军医大学学报,2003,24（5）：447.

［7］ 夏 星,Dao Nguyen. 黄芪多糖对丝裂霉素C（MMC）致骨髓抑制小鼠骨髓及脾细胞造血祖细胞的生成作用的影响［J］.中国药理通报,2003,19（7）:812.

［8］ 赵莲华，李 清,林 凡,等. 黄芪多糖协同顺铂对BEL-7404人肝癌细胞的杀伤作用［J］.实用癌症杂志，2005，20（1）：34.

［9］ 山广志,叶兴涛.注射用黄芪多糖联合化疗治疗84例晚期恶性肿瘤临床疗效观察［J］.中国肿瘤临床，2007，34（6）:355.